克隆pcr产物对照实验结果好，却没有回收到目的片段，实验出了什么问题？b2生物安全柜
a）
连接用室温保温小时，能满足大多数克隆，为提高效率，需℃过夜
b）
插入片段带有污染，使`-t缺失，或抑制连接，抑制转化
为此，将插入片段和gem-t正对照混合，再连接
如降低了对照的菌落数，插入片段需纯化，或重新制备
如产生大量的蓝斑，插入片段污染有核酸酶，使gem-t或gem-t e载体`-t缺失
c）
插入片段不适于连接
用凝胶纯化的插入片段，因受uv过度照射，时有发生
uv过度照射会产生嘧啶二聚体，不利于连接，dna必需重新纯化
d）
带有修复功能的耐热dna聚合酶的扩增产物末端无a，后者是gem-t或gem-t e载体克隆所需
加t dna聚合酶和核苷酸可在末端加a
详情查gem-t gem-t e载体技术资料（tm）
e）
高度重复序列可能会不稳定，在扩增中产生缺失和重排，如发现插入片段高频率地产生缺失和重排，需用重组缺陷大肠杆菌菌株，如sure细胞
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产物的电泳检测时间
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出现非特异性扩增带
扩增出现片状拖带或涂抹带
克隆pcr产物的最优条件是什么？
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