实验十九。培养液中酵母群体的变化
酵母是一种食品工程菌，常用于酿酒和膨化面食。进入新的培养环境后，酵母种群的变化将遵循什么规律？在本实验中，我们利用血细胞计数板估算了培养基中酵母的种群密度，计算了种群数量，并探讨了培养基中酵母种群数量在7天内的变化规律。
材料用具
安琪酵母粉、土豆、蔗糖、天平、蒸馏水、50毫升锥形瓶、棉塞、500毫升烧杯、量筒、纱布、高压釜、酒精灯、恒温培养箱、冰箱、滴管、0.2%亚甲基蓝溶液、血细胞计数板、显微镜等。
马铃薯培养基:将100克马铃薯和10克蔗糖在水中煮沸15分钟，用纱布过滤，然后加水至500毫升的恒定体积。用量筒装入7个50毫升锥形瓶中，用棉塞塞住，用旧报纸和棉线密封，用高压蒸汽灭菌备用。
0.2%亚甲蓝溶液:将0.2 g亚甲蓝粉末溶解在100毫升蒸馏水中。
步骤
1.酵母培养
每天用酒精灯用0.25克干酵母粉对一瓶培养基进行灭菌，接种密度约为6×107个细胞/毫升。这样，七种介质的初始人口密度基本相同。然后，将接种的培养基放入30℃恒温培养箱中培养。七天之后，第一天培养的酵母培养七天，而第七天培养的酵母仅培养一天(图1)。培养完成后，将所有培养基保存在4℃的温度下，在此温度下酵母停止生长，不会在短时间内死亡。
图1培养中的酵母
2.培养液的稀释和染色
在实验之前，将1毫升振荡培养液加入到含有48毫升蒸馏水的锥形瓶中，然后加入1毫升0.2%亚甲蓝水溶液，将原始培养液稀释50倍。亚甲蓝可以使死亡细胞染成蓝色，而活细胞不会，这可以帮助我们在显微镜下区分死亡细胞和死亡细胞(图2)。
图2用亚甲蓝染色的酵母活细胞和死细胞
3.用血细胞计数板计数
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血细胞计数板是一种特殊加厚的载玻片，中间的“h”形导流槽将载玻片分为两个台面，每个台面有一个计数室(图3)。通过在显微镜下对计数室中的酵母细胞或其他细胞进行计数，可以计算出原始培养液中的细胞密度。
图3血细胞计数板的物理图
首先，用专用的计数盖玻璃覆盖计数室，计数室和盖玻璃之间的液体高度为0.1毫米。用滴管将待计数的培养液吹混后，吸取培养液，从计数室和盖玻璃之间的斜面注入。由于毛细作用，培养液将渗入计数室。当培养液充满计数室时，停止注射。让它静置一段时间，等待细胞沉淀，然后你可以在镜子上观察它。
观察前，注意将计数室与光孔对准，并将光圈关闭到最小。这使得计算方块更容易找到。
通过调整4倍镜下的准聚焦螺旋找到中心正方形，将其放在视野的中心，并将其改为10倍镜。可以看出，面积为1 mm2的中心广场由25个双线框架的中间广场组成(图4)，每个中间广场有16个小广场，所以一个中心广场有400个小广场，每个小广场的面积为1/400 mm2，即柜台板上的25和1/400。
图4中心广场实物图
接下来，在左上方、右上方、左下方、右下方和中央正方形的中间正方形中的活酵母细胞被取样，并用40倍的镜子在五个点进行计数。在计数时，我们应该遵循取压线上的细胞而不取下来的原则，取左边而不是右边。
在计算了五个指定方块中的单元数量后，将它们相加，再除以5，得到每个方块中单元的平均数量。将其乘以25，得到中心正方形的单元数。每立方毫米的细胞数通过除以正方形中培养基的体积获得。由于1毫升等于1000立方毫米，每毫升稀释液中的细胞数乘以1000后得出。每毫升储备溶液中的细胞数是通过将记录的稀释倍数相乘得到的(图5和6)。
图5计算公式的推导
图6简化计算公式
4.数据处理和分析
实验前，将班里的学生分成七组，每组指定一名组长，负责接收和分发稀释液，在规定的时间内收集组内数据，计算组内平均值，丢弃差值超过一个数量级的数据以减少误差，然后向全班汇报。根据收集到的数据，学生画出培养基中酵母种群密度在7天内的变化曲线(图7)，找出其变化规律，并利用现有知识对其进行合理解释。
图7 7天内培养基中酵母种群密度的变化曲线
讨论
(略)
参考
匡尼娜。引用该论文王志平，王志平，王志平.实验教学与仪天阿降临最新章节器，2010(s2):96。
实验报告
(略)
文章来源：www.atolchina.com